實(shí)驗(yàn)室中常用的是以硅膠和氧化鋁做固定相的吸附柱。硅膠層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離，一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個(gè)層析過(guò)程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過(guò)程。
 

　　雖然很多化學(xué)實(shí)驗(yàn)書(shū)中都敘述了層析柱的實(shí)驗(yàn)方法，但大多數(shù)都是比較雷同地泛泛地描述，而且有些描述在實(shí)驗(yàn)室中并不適用。
 

　　例如，很多書(shū)中都提到裝柱時(shí)先在底層鋪一層石英砂，倒入固定相后再在頂部鋪一層石英砂。比較繁瑣，而且效果也不是很好，在實(shí)驗(yàn)室中不適用。
 

　　根據(jù)多年來(lái)使用層析柱的操作經(jīng)驗(yàn)，接下來(lái)為大家分享一下層析柱的硅膠及洗脫劑的使用吧。
 

　　1、硅膠的使用
 

　　初做層析柱很容易把柱子裝得長(zhǎng)了或短了，有時(shí)還會(huì)有大量的硅膠剩余，浪費(fèi)硅膠，這主要是對(duì)硅膠等固定相的使用的量沒(méi)有掌握。層析柱用的硅膠一般是100-200目，100毫升硅膠的質(zhì)量在47克左右，如果裝一個(gè)直徑是2.8厘米的柱子，可以裝18厘高。
 

　　為了避免浪費(fèi)硅膠和溶劑，最初學(xué)習(xí)裝柱時(shí)最好對(duì)實(shí)驗(yàn)室中各種不同規(guī)格的柱子摸摸底。方法很簡(jiǎn)單：用量筒量出100毫升干硅膠，直接倒入各種規(guī)格的柱子中，敲實(shí)，用刻度尺量出硅膠在柱子中的高度，這樣就可以做到心中有數(shù)了。
 

　　一般在裝柱的時(shí)候可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需柱子的高度來(lái)調(diào)整硅膠的使用量，這樣就可以大大地節(jié)省硅膠的使用，避免造成沒(méi)有必要的浪費(fèi)。稱(chēng)量硅膠時(shí)一般稱(chēng)30~70倍于上樣量，如果極難分，也可以用100倍量以上的硅膠。
 

　　2、洗脫劑的使用
 

　　洗脫劑的極性可用薄層層析來(lái)確定，一般以待分離樣品Rf值為0.2-0.3為宜。選擇的洗脫劑應(yīng)該使兩相鄰物質(zhì)Rf值之差大化。不要認(rèn)為在板上爬得高分離的效果就比較好，如果Rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的過(guò)程，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
 

　　有時(shí)雖然在薄層板上看到分離的效果很好，但過(guò)層析柱時(shí)還是很難分開(kāi)。這主要的原因就是薄層層析用硅膠比層析柱用硅膠要細(xì)得多，所以分離效果好。
 

　　解決的辦法就是降低洗脫劑的極性，一般層析柱用洗脫劑比薄層層析用的展開(kāi)劑極性要再降低一倍可以達(dá)到比較好的分離效果。當(dāng)所分離物質(zhì)極性跨度較大時(shí)，可用采梯度洗脫的方法，即逐漸增加溶劑的極性，使吸附在硅膠上的不同化合物逐個(gè)洗脫下來(lái)。
 

　　常用的展開(kāi)劑極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng);極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng);極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng);拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。對(duì)于很難分離的化合物，一是增加柱子的長(zhǎng)度和直徑，二是減小洗脫劑的極性，這樣可以很好地將混合物分開(kāi)。
 

　　在同樣能洗脫的情況下，盡量使用毒性小的洗脫劑。例如，乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)和二氯甲烷：石油醚系統(tǒng)，在同樣都能洗脫的情況下，應(yīng)該用毒性小的乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)。
 

　　另外洗脫劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。
 

　　這里要注意的是，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，混合溶劑的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適。還有一般回收的溶劑中會(huì)有少量水分，使用前先要用干燥劑干燥好才能使用。